زراعة الميكروبات: الدليل التشغيلي والاحتياطات

المبادئ التجريبية

متطلبات النمو

1. وسائل الإعلام الغنية بالمغذيات : الكربوهيدرات والبروتينات والفيتامينات والمعادن.
2. درجة الحرارة المثلى : عادة 20–40°C ، يختلف حسب الأنواع.
3. توازن الرقم الهيدروجيني : أكثر تزدهر في الرقم الهيدروجيني 6.5–7.5.
4. بيئة الغاز : Aerobes تحتاج الأكسجين. اللاهوائية تتطلب ظروف خالية من الأكسجين.

التحضير المتوسط

• الخطوات الرئيسية :
  1. قياس المكونات بدقة لكل وصفة.
  2. تفاصيل السجل: النوع المتوسط ​​، درجة الكاشف ، درجة الحموضة ، الحجم ، معلمات التعقيم ، وتاريخ التحضير.
• مثال ملاحظة وصفة :
  "LB Medium (500ml): 10G Tryptone ، 5G خميرة خميرة ، 10 جرام كلوريد الصوديوم ، الرقم الهيدروجيني 7.2 121°C لمدة 30 دقيقة في 2025-06-26 من قبل المشغل A. "

تقنيات التعقيم

طرق التلقيح

1. متعرج : انتشار خطي على الوسائط الصلبة (حلقة التلقيح).
2. تلقيح ثلاث نقاط : الموضع الثلاثي لدراسة التشكل الفطري.
3. التقييم الطعن : اللاهوائية الحفاظ على الأجر العميق 穿刺.
4. صب لوحة : خلط الثقافة مع 45°ج آجار المنصهر.
5. لوحة انتشار : طلاء موحد باستخدام انتشار زجاجي.
6. نقل السائل : pipetting بين الوسائط السائلة/الصلبة.
7. التلقيح الحقن : للكائنات الحية (على سبيل المثال ، إدارة اللقاح).
8. التلقيح المباشر للمضيف : ثقافة الفيروس في الأجنة أو الأنسجة الحيوانية.

الحفاظ على سلالة

• هدف : تقليل النشاط الأيضي لمنع الطفرة أو الموت.
• الظروف الرئيسية : درجة حرارة منخفضة ، جفاف ، نقص الأكسجين ، الحد من المغذيات.

طرق الحفظ

1. أجار التبريد :
   • تطعيم المائل ، احتضان ، التفاف في رقائق ، تخزين في 4°C.
   • جدد كل 2–3 أشهر يزحف شبه الصلبة 6–12 شهرا.
2. الحفاظ على البارافين السائل :
   • تعقيم البارافين (121°ج/30 دقيقة) ، جاف في 110°C.
   • تراكب الثقافات مع البارافين 1 سم ، وتخزينها في وضع مستقيم في 4°C.

الاحتياطات الحرجة

• صيانة العقم :
  • أدوات اللهب قبل/بعد الاستخدام ؛ العمل ضمن 15 سم من Bunsen Burner.
• الرقابة البيئية :
  • الحفاظ على رطوبة المختبر <60 ٪ تجنب المسودات أثناء التلقيح.
• تدابير السلامة :
  • استخدام خزائن السلامة الحيوية للثقافات المسببة للأمراض ؛ النفايات التلقائية قبل التخلص منها.