Экспериментальные принципы
Большинство бактерий являются гетеротрофическими, что требует богатых питательными веществами среды и контролируемых условий (температура, влажность, газ) для роста. Имитируя их естественную среду обитания, мы обеспечиваем быстрое пролиферацию ex vivo.
Требования к росту
-
Богатые питательными веществами
: Углеводы, белки, витамины и минералы.
-
Оптимальная температура
: Обычно 20–40°C, варьируется по видам.
-
ph баланс
: Самый процветающий при рН 6.5–7.5.
-
Газовая среда
: Аэробуз нуждается в кислороде; Анаэробиты требуют условий без кислорода.
Средняя подготовка
-
Ключевые шаги
:
-
Точно измерить компоненты на рецепт.
-
Детали записи: средний тип, оценка реагента, рН, объем, параметры стерилизации и дата подготовки.
-
Пример рецепта примечания
:
"LB Medium (500 мл): 10 г триптона, 5G -экстракт, 10G NaCl, pH 7,2, автоклавирован при 121°C в течение 30 минут на 2025-06-26 от оператора A. "
Методы стерилизации
Метод
|
Принцип
|
Приложения
|
Температура/время
|
---|
Химический
|
Белок денатурация
|
Стеклянная посуда, поверхности (этанол, лизол)
|
Не для СМИ
|
Излучение
|
Фотохимическое повреждение нуклеиновой кислоты
|
Воздушная и поверхностная стерилизация (ультрафиолетовое излучение)
|
15–30 минут экспозиции
|
Сухой огонь
|
Окисление и денатурация белка
|
Стеклянные/металлические инструменты (140–180°C)
|
1–2 часы
|
Влажная тепло
|
Сторонный нарушение связи
|
СМИ и оборудование (121°C)
|
30 мин при 15 фунтов на квадратный дюйм
|
Фильтрация
|
Физический барьер (0.01–0.45μМ Поры)
|
Теплочувствительные решения
|
Температура окружающей среды
|
Методы инокуляции
-
Полоса
: Линейное распространение на твердой среде (петля инокуляции).
-
Прививка с тремя точками
: Треугольное размещение для изучения морфологии грибов.
-
Прививка
: Сохранение Anaerobe через глубокий агар 穿刺.
-
Вылейте тарелку
: Смешивание культуры с 45°C расплавленный агар.
-
Распределить тарелку
: Единое покрытие с использованием стеклянного разбрасывателя.
-
Перенос жидкости
: Пипетирование между жидкостью/твердой средой.
-
Инъекционная прививка
: Для живых организмов (например, введения вакцины).
-
Живая прививка хозяина
: Вирусная культура у эмбрионов или тканей животных.
Сохранение напряжения
-
Цель
: Минимизировать метаболическую активность, чтобы предотвратить мутацию или смерть.
-
Ключевые условия
: Низкая температура, сухость, аноксия, ограничение питательных веществ.
Методы сохранения
Агар наклонное охлаждение
:
-
Прививать наклоны, инкубировать, обернуть в фольгу, хранить в 4°C.
-
Обновлять каждый 2–3 месяца; Полусолидные наклоны в последний раз 6–12 месяцев.
Жидкое парафиновое сохранение
:
-
Стерилизовать парафин (121°C/30 мин), сухо 110°C.
-
Наложения культур с парафином 1 см, хранить в вертикальном положении в 4°C.
Критические меры предосторожности
-
Техническое обслуживание бесплодия
:
-
Пламени инструменты до/после использования; Работа в пределах 15 см от горелки Бунзена.
-
Экологический контроль
:
-
Поддерживать влажность лаборатории <60%; Избегайте проектов во время прививки.
-
Меры безопасности
:
-
Использовать биобезопасные шкафы для патогенных культур; Автоклавные отходы перед утилизацией.