Culture microbienne: guide opérationnel et précautions

Principes expérimentaux

Exigences de croissance

1. Médias riches en nutriments : Glucides, protéines, vitamines et minéraux.
2. Température optimale : Typiquement 20–40°C, varie selon les espèces.
3. équilibre pH : La plupart prospèrent à pH 6.5–7.5.
4. Environnement gazière : Les aérobes ont besoin d'oxygène; Les anaérobies ont besoin de conditions sans oxygène.

Préparation moyenne

• Étapes clés :
  1. Mesurer avec précision les composants par recette.
  2. Détails de l'enregistrement: type moyen, grade de réactif, pH, volume, paramètres de stérilisation et date de préparation.
• Exemple de note de recette :
  "LB Medium (500 ml): 10g tryptone, extrait de levure 5G, 10G NaCl, pH 7,2, autoclave 121°C pendant 30 min le 2025-06-26 par l'opérateur A. "

Techniques de stérilisation

Méthodes d'inoculation

1. Strike : Répartition linéaire sur des milieux solides (boucle d'inoculation).
2. Inoculation à trois points : Placement triangulaire pour l'étude de morphologie fongique.
3. Inoculation : Préservation de l'anaérobe via une gélose profonde 穿刺.
4. Plaquer : Mélanger la culture avec 45°C gélose en fusion.
5. Plaque à propagation : Placage uniforme à l'aide d'un épandier de verre.
6. Transfert de liquide : Pipetage entre les milieux liquides / solides.
7. Inoculation d'injection : Pour les organismes vivants (par exemple, l'administration des vaccins).
8. Inoculation de l'hôte en direct : Culture virale dans les embryons ou les tissus animaux.

Conservation de tension

• But : Minimiser l'activité métabolique pour prévenir la mutation ou la mort.
• Conditions clés : Basse température, sécheresse, anoxie, limitation des nutriments.

Méthodes de conservation

1. Réfrigération inclinable d'agar :
   • Inoculer les inclinaisons, incuber, envelopper dans du papier d'aluminium, stocker à 4°C.
   • Renouveler chaque 2–3 mois; Les inclinaisons semi-solides durent 6–12 mois.
2. Conservation de paraffine liquide :
   • Stériliser la paraffine (121°C / 30 min), sécher à 110°C.
   • Cultures de superposition avec de la paraffine 1 cm, magasin debout à 4°C.

Précautions critiques

• Entretien de stérilité :
  • Outils de flamme avant / après utilisation; Travaille à moins de 15 cm du brûleur Bunsen.
• Contrôle de l'environnement :
  • Maintenir l'humidité du laboratoire <60%; Évitez les brouillons pendant l'inoculation.
• Mesures de sécurité :
  • Utilisez des armoires de biosécurité pour les cultures pathogènes; Déchets d'autoclave avant l'élimination.