Cultivo microbiano: guía operacional y precauciones

Principios experimentales

Requisitos de crecimiento

1. Medios ricos en nutrientes : Carbohidratos, proteínas, vitaminas y minerales.
2. Temperatura óptima : Típicamente 20–40°C, varía según las especies.
3. balance de pH : La mayoría prospere a pH 6.5–7.5.
4. Ambiente de gas : Los aerobios necesitan oxígeno; Los anaerobios requieren condiciones sin oxígeno.

Preparación media

• Pasos clave :
  1. Medir con precisión los componentes por receta.
  2. Detalles del registro: tipo medio, grado de reactivo, pH, volumen, parámetros de esterilización y fecha de preparación.
• Ejemplo de nota de receta :
  "Medio LB (500 ml): 10 g de triptone, 5 g de extracto de levadura, 10 g de NaCl, pH 7,2, autoclave a 121°C durante 30 minutos en 2025-06-26 por el operador A. "

Técnicas de esterilización

Métodos de inoculación

1. Ritmo : Dispersión lineal en medios sólidos (bucle de inoculación).
2. Inoculación de tres puntos : Colocación triangular para el estudio de morfología fúngica.
3. Inoculación de puñalada : Preservación de Anaerobe a través de agar profundo 穿刺.
4. Verter : Mezclar cultura con 45°C Agar fundido.
5. Placa de propagación : Chapado uniforme con un esparcidor de vidrio.
6. Transferencia líquida : Pipeteo entre medios líquidos/sólidos.
7. Inoculación de inyección : Para organismos vivos (por ejemplo, administración de vacunas).
8. Inoculación en vivo del huésped : Cultivo de virus en embriones o tejidos animales.

Preservación de tensión

• Meta : Minimizar la actividad metabólica para prevenir la mutación o la muerte.
• Condiciones clave : Baja temperatura, sequedad, anoxia, limitación de nutrientes.

Métodos de preservación

1. Refrigeración de la inclinación de agar con agar :
   • Inoculado inclinaciones, incubar, envolver en papel de aluminio, almacenar en 4°C.
   • Renovar todo 2–3 meses; Slants semi-sólidos Últimos 6–12 meses.
2. Preservación de parafina líquida :
   • Esterilizar parafina (121°C/30 min), seco a 110°C.
   • Culturas superpuestas con parafina de 1 cm, almacenar en posición vertical en 4°C.

Precauciones críticas

• Mantenimiento de la esterilidad :
  • Herramientas de llama antes/después de usar; Trabajar dentro de los 15 cm del quemador Bunsen.
• Control ambiental :
  • Mantener la humedad de laboratorio <60%; Evite los borradores durante la inoculación.
• Medidas de seguridad :
  • Use gabinetes de bioseguridad para cultivos patógenos; Residuos de autoclave antes de la eliminación.